ELISA試劑盒進口大鼠如何解決產(chǎn)生組織切片非特異性染色
1、 抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。
2、 一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。
3、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織)，ELISA試劑盒進口大鼠需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
4、 非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果;
5、 DAB孵育時間過長或濃度過高;
6、 PBS沖洗不充分，殘留抗體結(jié)果增強著色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
7、 標本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色。
ELISA試劑盒進口大鼠解決方案
1、首先排除抗體孵育條件。一般來說，著色效果的好壞與抗體的孵育條件是密不可分的，由于用SP法已經(jīng)做出來過一次且效果不錯，因此對于同樣組織的同一抗原進行分析，這種因素可以先排除。
2、其次，DAB孵育時間是否太長?做出來那一次我是孵育8min，后來也是8-10min，我單獨做了一次實驗來排除該因素。結(jié)果孵育2、5min時先出現(xiàn)背景，而特異性染色較淺，故這不符合常理，一般先出現(xiàn)特異性染色，然后隨著時間的延長，會出現(xiàn)非特異性背景著色。
3、zui后，血清封閉的問題?以前我一般孵育15-30min，所以我單獨做了一次實驗用血清封閉室溫1h，其它條件同做出來的那一次，結(jié)果也一樣背景著色很深。
4、對PBS清洗不斷地延長時間和增加次數(shù)，甚至*參照試劑盒說明書來進行操作(我以前一般一抗4度且室溫復溫45min、二抗37度30min、Sp反應(yīng)37度30min)，以及過氧化氫滅活加強等等均未起到效果。
5、步驟和組織切片*與*次做出來的一致(包括血清也是老試劑盒內(nèi)剩余的一點)，奇跡出現(xiàn)了：結(jié)果很好。--因為抗原抗體反應(yīng)除溫度、抗原/抗體濃度外，然后就是PH值，于是我測了新抗體稀釋液、老抗體稀釋液和PBS的PH值，ELISA試劑盒進口大鼠結(jié)果是前者偏酸性(<6、0)，而后兩者均在7、5左右。
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